安捷倫液相色譜儀的常見(jiàn)故障及解決方法
安捷倫液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比
的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。由于安捷倫液相色譜儀
HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集
等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應用到生物化學(xué)、食品分析、醫藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機
分析等各種領(lǐng)域。但是由于人員素質(zhì) 樣品的性質(zhì)以及儀器本身等方面的原
因, 常常出現這樣那樣的分析故障嚴重影響了正常的生產(chǎn)分析。所以掌握一種
準確、快速的排除儀器故障的方法非常重要。
安捷倫液相色譜儀的常見(jiàn)故障及解決方法:
1.柱壓高
可能原因:(1).緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內;
(2).樣品污染沉積;
處理對于*種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓
逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下 降后,用常溫純水沖洗,之
后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18
柱,和純水反向沖洗柱子,換成甲醇沖洗,接著(zhù)用甲 醇+異丙醇(4+6)沖洗
柱子,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分
鐘以上。
2.指示
可能原因:(1).泵密封墊圈磨損;
(2).大量氣泡進(jìn)入泵體。
處理對于*種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同
時(shí),用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
3.不穩定
原因系統中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。
處理工作中注意觀(guān)察流動(dòng)相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸
入空氣,流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,
放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4.峰分叉
可能原因:(1)、色譜柱被污染;
(2)、柱頭填料塌陷;
處理對于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著(zhù)
用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的 長(cháng)短由樣品污染的情況而
定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘
以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第 二種情況,擰開(kāi)
柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填
料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹 鋼桿
壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干
凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5.重復性差
可能原因:(1)、進(jìn)樣閥漏液;
(2)、加樣針不到位;
(3)、液量不足;
處理對于*種情況更換進(jìn)樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到
底,注射樣品溶液后須快速、平穩地從LOAD狀態(tài) 轉換到INJECT狀態(tài),以保證
進(jìn)樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養非常重要,注意不要讓空氣進(jìn)
入輸液系統和高壓泵中,儲液器內的溶液如長(cháng)時(shí)間未 用應清洗儲液器并更換
溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無(wú)機鹽析出或沉積;
樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),*溶解,盡量減
少對色譜柱的污染,以延長(cháng)色譜柱的使用壽命,同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶
液,以免殘留液在進(jìn)樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分
析目的的色譜柱不要混用等。
6.其他原因及處理方法
故障類(lèi)型 | 可能的原因 | 解決方案 |
基線(xiàn)噪聲大 | 隨機性- 污染物積聚沖 | 沖洗柱;凈化樣品;使用HPLC 級溶劑 |
連續性- 檢測器燈故障 | 更換紫外燈(壽命為1000 小時(shí)) | |
偶然性- 外部電氣干擾 | 使用LC 系統穩壓器 | |
樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 | |
雙峰 | 樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 |
進(jìn)樣溶劑過(guò)強 | 使用較弱的進(jìn)樣溶劑或流動(dòng)相 | |
濾芯堵塞 | 更換并使用0.5 μm 孔隙率的在線(xiàn)過(guò)濾器 | |
柱有空隙或氣溝 | 用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱 | |
進(jìn)樣器流路不通暢 | 更換進(jìn)樣器轉子 | |
柱頭有空隙 | 使用填料或玻璃珠填充柱頂部 | |
柱上樣品超載 | 使用更高負載量的固定相 增加色譜柱內徑 減少樣品量 | |
單峰- 存在干擾性組分 | 凈化樣品;預分離 | |
拖尾峰 | 開(kāi)始出雙峰 | 請參見(jiàn)雙峰 |
存在未掃的死體積 | 減少接頭的數量 確保進(jìn)樣器密封墊緊密 確保接頭正確固定 | |
堿性化合物- 硅醇相互作用 | 換成聚合物固定相 | |
堿性物質(zhì)- 硅醇相互作用 | 使用更強的流動(dòng)相或添加競爭堿(例如,*胺 | |
硅膠基- 柱降解 | 使用特種色譜柱;聚合物柱或空間位阻 | |
峰展寬 | 進(jìn)樣量過(guò)大 | 降低進(jìn)樣溶劑的強度以集中溶質(zhì) |
進(jìn)樣閥中的峰擴散 | 在進(jìn)樣前/后引入氣泡以減少擴散 | |
數據系統的采樣速率過(guò)低 | 增大采樣 | |
檢測器時(shí)間常數低 | 調節時(shí)間常數使之與峰寬匹配 | |
流動(dòng)相粘度過(guò)高 | 提高柱溫 | |
檢測器池容積過(guò)大 | 使用盡可能小的池容積(系統中無(wú)熱交換器) | |
注射器體積過(guò)大 | 減少進(jìn)樣量 | |
保留時(shí)間長(cháng) | 使用梯度洗脫或較強的流動(dòng)相 | |
壓力波動(dòng) | 單向閥泄漏 | 更換單向 |
泵密封墊泄漏 | 更換泵密封 | |
微粒積聚 | 過(guò)濾樣品;在線(xiàn)過(guò)濾器;過(guò)濾流動(dòng)相 | |
壓力漸增 | 微粒積聚 | 過(guò)濾樣品;在線(xiàn)過(guò)濾器;過(guò)濾流動(dòng)相 |
水/有機系統- 緩沖液沉淀 | 測試緩沖液-有機混合物;確保兼容性 | |
保留超出總滲透體積 | 體積排阻- 特異性相互作用 | 添加流動(dòng)相改性劑或更改溶劑 |
保留時(shí)間不斷變動(dòng) | 柱溫不斷變化 | 使柱恒溫;絕緣;保證實(shí)驗室溫度恒定 |
平衡時(shí)間不足以適應梯度洗脫要求,或等度洗脫流動(dòng)相起變化 | 確信在溶劑改變或梯度結束后至少10 個(gè)柱容積通過(guò)色譜柱 | |
流動(dòng)相組分選擇性蒸發(fā) | 減少氦氣的劇烈脫氣;保持溶劑貯器蓋好;制備新的流動(dòng)相 | |
緩沖能力不足 | 用>20 mM 濃度的緩沖液 | |
在線(xiàn)流動(dòng)相混合不一致 | 保證梯度系統輸送恒定組成;與手動(dòng)制備流動(dòng)相核對 | |
污染積聚 | 沖洗色譜柱以去除污染物 | |
初幾次進(jìn)樣— 吸附在活性部位 | 用濃樣品進(jìn)樣沖洗柱,使其處于正常狀態(tài) | |
保留時(shí)間逐漸縮短 | 流速在增加 | 檢查泵以確保正確;否則需重調 |
柱上進(jìn)樣超載 | 減少樣品 | |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH 值在2-8.5 間 | |
保留時(shí)間逐漸增加 | 流速在減慢 | 解決液流中的漏液現象,更換泵密封墊,檢查泵的渦流和氣泡 |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 使用流動(dòng)相改性劑 | |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH 值在2-8.5 間 | |
流動(dòng)相組成在變化 | 確保流動(dòng)相容器蓋好 | |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 流動(dòng)相中加競爭堿 | |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 固定相用更高覆蓋度的填充料 | |
靈敏度問(wèn)題 | 峰位于檢測器線(xiàn)性范圍之外 | 稀釋或濃縮使之處于線(xiàn)性區內 |
初幾次進(jìn)樣—樣品在樣品池或柱中被吸附自動(dòng)進(jìn)樣器 流路阻塞 | 用濃樣品處理樣品池/柱 | |
自動(dòng)進(jìn)樣器流路阻塞 | 檢查流量情況,確保無(wú)阻塞現象 | |
進(jìn)樣器樣品定量管未充滿(mǎn) | 確保樣品池中已充滿(mǎn)樣品 | |
在樣品制品時(shí)有關(guān)的樣品流失 | 用內標法在制備樣品,優(yōu)化樣品制備方法 | |
柱平衡時(shí)間減慢(離子對現象) | 長(cháng)鏈離子對試劑平衡時(shí)間慢 | 使用較短的烷鏈試劑 |